近期，宝藤生物与河南省安阳市肿瘤医院、郑大一附院合作，运用阴性富集联合免疫染色荧光原位杂交法评估了循环肿瘤细胞（CTC）对于食管癌治疗效果及预后评价的潜在临床意义。研究结果发现初诊到术后13天的CTC计数变化（ΔCTC）可能是预测食管鳞癌（ESCC）患者肿瘤预后和临床疗效的一个潜在指标，相关研究成果以《Clinical significance of detecting circulating tumor cells in patients with esophageal squamous cell carcinoma by EpCAM‑independent enrichment and immunostaining‑fluorescence in situ hybridization》为题于6月在线发表在Molecular Medicine Reports上。
研究背景
食管癌是起源于食管上皮的恶性肿瘤，具有侵袭性强、死亡率高的特点。食管癌的发病率在全世界各类癌症中排第8位，而其中包括中国在内的发展中国家占80%-85%。按照病理组织学分型，食管癌主要分为鳞癌和腺癌，食管鳞状细胞癌（ESCC）是我国食管癌的主要组织病理学亚型。尽管在手术和治疗方面取得了很大进展，但食管癌患者的预后仍然很差，总的5年生存率约为15%-25%。
目前，食管鳞癌的临床诊断主要基于血清蛋白肿瘤标志物、内镜和组织病理学方法。然而，SCC抗原和癌胚抗原（CEA）等血清学肿瘤标志物在临床诊断中的应用因其特异性和准确性低而受到限制；内镜检查不仅对微小肿瘤病变的敏感性较低，还因其侵入性造成患者的不适；此外，尽管组织病理学仍是肿瘤诊断的黄金标准，但它不能用于动态监测治疗反应，因为在这一过程中，接受过手术的患者无法提供病变组织。因此，需要一种有效的辅助诊断方法来检测早期食管癌，监测治疗反应，评估预后。
循环肿瘤细胞（CTC）是从原发肿瘤部位转移到循环系统的肿瘤细胞，通常具有很强的侵袭性和转移能力。CTC的个数及其表型可能为恶性肿瘤的诊断、治疗和预后提供有用的信息，然而，目前CTC在食管癌中的临床研究相对较少。
因此本研究于11月到7月间招募了安阳地区63名食管鳞癌患者及50名健康对照，对食管鳞癌患者于以下时间点分别采集7.5ml血液样本：初诊、新辅助化疗后、术后24小时、13天以及随访期间每3个月采集一次，对健康对照仅采集一次血样，并通过阴性富集联合免疫染色荧光原位杂交法检测了患者血液样本中的CTC个数，从而评估了CTC对于食管癌治疗疗效和预后评价的潜在临床意义。
研究结果
图1
如图1F所示， 细胞角蛋白（CK）阳性和循环肿瘤细胞团(CTC cluster)仅占总CTC的1%，而大多数CTC为CK阴性非整倍体细胞。
图2
食管鳞癌患者（n=63）的CTC个数显著高于健康对照（n=50）（P=0.0003，中位数分别为2和0）。然而，CTC个数与性别、年龄、病理分期、肿瘤位置、肿瘤浸润深度或淋巴结转移无统计学关系（P>0.05）。ROC曲线被用来评估CTC检测在区分患者和健康对照组时的有效性，如图2B所示，当cut‑off值为1个CTC/7.5 ml时，敏感性为74.6%，特异性为74.0%。ROC曲线下面积（AUC）为0.807（95%置信区间（CI），0.727～0.887），与CEA（AUC=0.87）和SCC抗原（AUC=0.726）相似。考虑到临床实际应用中CEA和SCC的cut‑off值分别为5μg/l和2.5μg/l，而对应的敏感性分别为4.8%和22.2%，显著低于cut‑off值为1个CTC/7.5 ml时CTC检测的敏感性，因此本结果显示出CTC检测的优越性。此外，逻辑回归模型预测结果表明，将三个生物标志物联合起来分析，最佳AUC可以进一步提高到0.941，这表明CTC与传统血清生物标志物组合将成为更高效的生物诊断标志物谱。
图3
此外，与CEA、SSC抗原的相关性分析表明， CTC检测是相对独立的检测指标。
图4
在术后随访中，肿瘤进展与CTC水平和其他血清生物标志物的关系被持续监控。在随访期间，CT扫描结果作为疾病进展监测的金标准，与CTC临床结果相验证，结果表明一些术后复发的患者在术后第13天CTC计数增加，提示术后13天的CTC计数可作为更好的预后指标。如图4D所示，对于12号患者，尽管术后第13天没有进行CTC检测，其CTC计数在第1-180天出现升高，然后逐渐减少。此外，与第270天相比，该患者在术后第360天观察到CTC显著增加，而在此后90天进行的CT扫描显示该患者病情出现进展。与CTC检测相比，传统标记物CEA/SCC抗原波动范围较小，既不能预测也不能准确提示这些患者是否出现疾病进展，从而进一步显示出CTC检测作为肿瘤病情进展监测标记物的优越性。
图5
63例食管鳞癌患者的中位随访时间为21个月（0-32个月）；在PFS分析的终点，共有15名食管鳞癌患者死亡或出现疾病进展（随访时间：中位数，10个月；范围为0-18个月）；其余无进展的食管鳞癌患者的中位随访时间为24个月（12-32个月）。Kaplan‑Meier分析结果显示，在初诊到术后13天的CTC计数变化ΔCTC≥2/7.5 ml时，食管鳞癌患者的无进展生存期显著减少（HR，3.922；95%置信区间，0.907-16.951；P<0.05）。
结论
ΔCTC可能是预测食管鳞癌患者肿瘤预后和临床疗效极具潜力的指标。然而由于本研究入组患者数量较少且随访时间短，从而限制了本研究的临床价值。为系统评价SE-IFISH技术在食管癌患者CTC检测中的临床意义，有必要开展一项更大样本量和更长随访期的前瞻性研究。此外，还需要分离循环肿瘤细胞团(CTC cluster)，并根据不同的细胞类型对其进行分析并与患者预后进行比较。目前，在多种类型的癌症中已经开始应用二代测序和单细胞测序技术对CTC进行高通量测序进而监测疾病进展中的基因变异，以及破译治疗期间的肿瘤演变以及上皮间质转换机制，这些发现将为今后的研究提供新的方向和思路。随着分子检测和测序方法的不断进步和完善，CTC检测技术未来作为评价癌症预后和疗效的生物标志物方面有望展现出更大的潜力。
作为精准医学大数据领域的知名企业，宝藤生物致力于用先进的技术为大众提供优质的精准医学服务。目前我们提供循环肿瘤细胞（CTC）检测，通过对血液中的循环肿瘤细胞CTC进行捕获、识别和计数，有助于肿瘤的早期检测、预后评估和疗效监测，为医生更好的监测患者疾病进展并给出最佳的治疗方案提供依据。该检测涵盖的癌种包括乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、食管癌等十几种。
参考文献：
Molecular Medicine Reports. Zhang et al. Clinical significance of detecting circulating tumor cells in patients with esophageal squamous cell carcinoma by EpCAM‑independent enrichment and immunostaining‑fluorescence in situ hybridization. /10.3892/mmr..10420
